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        內蒙古嘧啶
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        磺胺二甲氧嘧啶單克隆抗體的制備及免疫學快速檢測方法的建立:

        2019-12-06

        內蒙古玉嘧磺胺:磺胺類藥物(sulfonamides,SAs)在臨床上主要用于預防和治療細菌感染性疾病,還常作為飼料添加劑在動物生產中長期應用。然而過量使用會引起人過敏性反應,且可能有致癌性,因此在動物性食品中殘留引起生態環境污染和人類健康危害的潛在威脅已倍受關注,而磺胺二甲氧嘧啶(SDM)在磺胺類藥物的使用中占有很大比例。因此,研究出一種操作簡便、快速、靈敏的測定SAs殘留的方法,對于畜產品的安檢具有實際意義。 本研究在分析磺胺二甲氧嘧啶分子結構和免疫原性的基礎上,運用單克隆抗體技術生產了單抗,并組裝了其免疫學快速檢測試劑盒和試紙條。主要研究結果如下: 1.用重氮化方法將SDM偶聯于牛血清白蛋白(BSA)和雞卵清蛋白(OVA),合成了人工免疫原BSA-SDM和包被抗原OVA-SDM,通過紫外(UV)、SDS-PAGE和免疫小鼠后抗血清的ELISA鑒定,表明BSA-SDM偶聯成功,獲得了高價、敏感、特異的抗血清。 2.用BSA-SDM免疫Balb/C小鼠5只,4次免疫后用間接ELISA和阻斷ELISA選擇出細胞融合備用小鼠1只,內蒙古玉嘧磺胺應用細胞融合技術篩選出1B4、3D9、4E1共3株敏感特異的雜交瘤細胞,用體內誘生腹水法制備SDM mAb,經鑒定,其間接ELISA效價細胞培養上清分別為1:3.2×10~2、1:5.12×10~2、1:8.1×10~2,腹水效價分別為1:2.56×10~5、1:2.56×10~5、1:5.12×10~5,親和常數(Ka)分別為2.16×10~9、3.28×10~9、1.71×10~(10)(L/mol),其中親和力較高的4E1株阻斷ELISA測定其IC_(50)為16.64ng/ml,與磺胺間甲氧嘧啶的交叉反應率為5%,與其他同類化合物無CR。本實驗制備的SDM mAb可用于SDM殘留檢測的免疫學試驗。 3.應用SDM mAb,依據酶聯免疫吸附實驗和膠體金免疫層析試驗(GICA)原理,分別組裝了SDM殘留快速檢測阻斷ELISA試劑盒和快速檢測免疫金標試紙(SDM-Strip)。SDM-Kit的標準曲線呈S型,符合4參數logit曲線擬合,線性檢測范圍為1.0~128.0ng/ml。并用于檢測尿液中磺胺二甲氧嘧啶的殘留,試劑盒進行豬尿中的磺胺二甲氧嘧啶殘留檢測可以在一個小時內完成;試紙條則可以在8到10分鐘內完成。兩種產品均具有快速、敏感、特異、簡便等特點,內蒙古玉嘧磺胺適合于SDM殘留快速檢測的推廣應用。

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